DNA의 Ligation
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작성일 22-12-02 00:24
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이 反應에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다.
• 일반적으로 vector의 크기 1 kb당 50~100 ng의 양이면 vector의 양은 충분하며 insert는 크기에 따라 vector와 몰비를 고려하여 혼합한다. RNA ligase는 single strand의 DNA 또는 RNA 끼리 연결해 주는 효소로 5`-RACE와 같은 특수한 목적의 experiment(실험)에서 사용될 수 있으나 이 장에서는 설명(說明)하지 않았다. 몰비는 experiment(실험)자에 따라서 1:1(…(To be continued )
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DNA의 Ligation의 Cohesive end ligation와 Blunt end ligation의 實驗(실험)방법에 마주향하여 요약한 입니다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 물론 vector와 insert는 끝이 같은 모양을 하고 있어야 한다. 즉 같은 제한효소에 의해 절단되어 같은 조각을 이루고 있어야 한다.
유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 origin한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다.
설명
DNA의 Ligation의 Cohesive end ligation와 Blunt end ligation의 실험방법에 대해서 정리한 자료입니다. , DNA의 Ligation공학기술레포트 ,
DNA의 Ligation
다.
순서
레포트/공학기술
A. Cohesive end ligation
❑ experiment(실험)방법
B. Blunt end ligation
❑ experiment(실험)방법
Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다아
A. Cohesive end ligation
❑ experiment(실험)방법
1. experiment(실험)에 사용할 vector와 insert를 준비한다.
2. Vector와 insert의 몰비(molar ratio)가 1:2를 이루도록 미세 원침관에 혼합하여 담는다.
